Carpeta Genetica TP8 Cromatografia 2019

TRABAJO PRÁCTICO N° 8: Cromatografía de ojos en Drosophila melanogaster Objetivos o Observar que los distintos fenotipos referidos al color de ojos en drosófilas están relacionados con pigmentos detectables por la técnica de cromatografía en placa delgada. Introducción La cromatografía en placa delgada y su uso en drosófila La cromatografía en capa fina (CCF) es una técnica cromatográfica que utiliza una placa inmersa verticalmente en una fase móvil (eluyente). Esta placa cromatográfica consiste en una fase estacionaria polar (comúnmente se utiliza sílica gel) adherida a una superficie sólida. La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte (1). En los especímenes de D.melanogaster salvajes (línea denominada Sammarkand por ejemplo), la pigmentación de los ojos se debe a la deposición y mezcla de dos grupos de pigmentos distintos en cada omatidio: pteridinas y ommocromos; los primeros son compuestos de colores brillantes que emiten fluorescencia y una luz de color característica cuando se observan bajo luz ultravioleta. Los ommocromos son marrones y no emiten fluorescencia a la luz ultravioleta (2). Las pteridinas también se conocem como drosopterinas y los ommocromos como xantomatina. Cada pigmento se produce en rutas bioquímicas distintas. Cada paso de cada ruta está catalizado por una enzima distinta que está bajo el control de un gen diferente. La mutación brown, en homozigosis, interrumpe la vía que conduce a la síntesis del pigmento rojo brillante. Debido a que sólo queda xantomatina, el color del ojo es marrón. La mutación recesiva scarlet afecta a un gen localizado en un autosoma distinto, que interrumpe la ruta que conduce a la síntesis de la xantomatina marrón y da lugar a un ojo de color rojo brillante en las moscas mutantes homozigotas. Cada mutación da lugar, aparentemente, a una enzima no funcional. Las moscas que son mutantes dobles, y por ello homozigotas para brown y scarlet, carecen de ambas enzimas funcionales y no pueden producir ninguno de los dos pigmentos. La ausencia de pigmento en estas moscas no se debe a la mutación white ligada al X, en donde los pigmentos se pueden sintetizar, pero los precursores necesarios no se pueden transporta a las células que constituyen los omatidios (3). La F1 resultante del cruzamiento Curly + (yellow+, white) x Normal ; (yellow, white+) debería haber presentado hembras de ojos rojos, dado que heredan el cromosoma X paterno, según el siguiente esquema: (obtenido de 5)

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Sin embargo, la observación de los ojos de las hembras no correspondió con ojos rojos, sino de un naranja claro. Esto nos hace pensar que los pigmentos de la cepa yellow no son iguales a los pigmentos de la cepa Sammarkand, de ojos rojos ladrillo. Desarrollo del trabajo práctico Se seguirá el método de Hadorn y Mitchell (4) para preparar las moscas. Las moscas a utilizar serán en todos los casos 5 individuos de las razas Curly (ojos blancos); yellow (ojos rojos brillantes); Sammarkand (ojos rojos color salvaje) y las hembras F1 del cruzamiento Curly x yellow (que presentan ojos color naranja muy claro). Siguiendo a Hadorn y Mitchell las moscas se colocan unos segundos en alcohol; luego se pasan a agua hirviendo durante 1 minuto, se extrae el agua remanente con papel toalla. Bajo estereomicroscopio se extraen las cabezas, las que se colocan sobre una línea dibujada con lápiz a dos cm de la parte inferior de la placa para cromatografía y se aplasta con un rodillo metálico. La placa se coloca en una cuba de cromatografía cargada con la solución de la fase móvil consistente en 150 mL de una mezcla formada por 20: 3: 7 de butanol, ácido acético y agua destilada (2). Informe En grupos de dos deberán presentar el informe con los siguientes contenidos. Hipótesis: Redactar la hipótesis de trabajo. Métodos: Indicar cómo hicieron el trabajo Resultados: Indicar que observaciones pudieron hacer Conclusión: Indicar a qué conclusiones llegaron. Discusión: Indicar si lo que esperaban ver coincide con la hipótesis de partida, si encontraron otra bibliografía que ayude a explicar y entender los resultados obtenidos. Referencias bibliográficas: Listar la bibliografía consultada y citada en el trabajo.

Referencias bibliográficas del presente trabajo práctico 1. Wikipedia. https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina. Consultado 10/5/2019 2. https://steemit.com/spanish/@norihany/cromatografia-de-cuerpo-y-ojos-en-drosophilamelanogaster-mosca-de-la-fruta 3. Klug. Conceptos de Genética. 8va Edición. Pearson. 2006. Pág 88-89. 4. Hadorn, E. and H.K. Mitchell. 1951. Properties of mutants of Drosophila melanogaster and changes during development as revealed by paper chromatography. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 37: 650-665. 5. https://sites.google.com/site/drosophilamelanogastermkl/gentica-de-drosophilamelanogaster/composicin-genetica

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Tabla de contenidos del presente cuadernillo TRABAJO PRÁCTICO N° 1: Las tablas de Genética ............................................................ 1 Objetivos ........................................................................................................................... 1 Desarrollo .......................................................................................................................... 1 El tablero de Punnet (Reginald Punnet) .......................................................................... 1 Las Tablas de Genética................................................................................................... 1 TRABAJO PRÁCTICO N° 2: Resolución de problemas principio de segregación y transmisión independiente ...................................................................................................... 2 Objetivos ........................................................................................................................... 2 Desarrollo: ......................................................................................................................... 2 TRABAJO PRÁCTICO N° 3: Reconocimiento de fenotipos en arvejas y sistematización de datos ...................................................................................................................................... 3 Objetivos .......................................................................................................................... 3 Desarrollo .......................................................................................................................... 3 Introducción ................................................................................................................... 3 Materiales ...................................................................................................................... 4 Procedimiento ................................................................................................................ 4 Caracterización de Accesiones de Diferentes Semillas.................................................... 4 Referencias .................................................................................................................... 5 TRABAJO PRÁCTICO N° 4: Otros problemas de Genética .................................................. 6 Ejemplos de Herencia ligada al sexo .......................................................................... 6 Ejemplo de letal en homocigosis ................................................................................. 6 Ejemplo Transmisión Independiente ........................................................................... 6 TRABAJO PRÁCTICO N° 5: Cruzamientos con arvejas ....................................................... 8 Objetivos ........................................................................................................................... 8 Primera Parte ..................................................................................................................... 8 Segunda Parte .................................................................................................................. 11 Tercera Parte .................................................................................................................... 12 Cuarta Parte ..................................................................................................................... 15 ANEXO: .......................................................................................................................... 16 TRABAJO PRÁCTICO N° 6: Cruzamientos con Drosófilas. Observando F1 y F2 en Laboratorio .......................................................................................................................... 17 Primer encuentro .............................................................................................................. 17 Objetivo General .............................................................................................................. 17 Objetivo de la actividad del primer encuentro: .............................................................. 17 Introducción: .................................................................................................................... 17 Cepas utilizadas ........................................................................................................... 17 Notación ...................................................................................................................... 18 Medio de cultivo .......................................................................................................... 18 Segundo encuentro ........................................................................................................... 19 Objetivo de la actividad del segundo encuentro: ........................................................... 19 Reconocimiento del sexo en moscas adultas: ................................................................ 19 Recolección de hembras vírgenes ................................................................................. 19 Materiales a utilizar: ..................................................................................................... 19 Forma de dormir las moscas ......................................................................................... 20 Selección de parentales P1. .......................................................................................... 20 Tercer encuentro .............................................................................................................. 21 Objetivo de la actividad del tercer encuentro: ............................................................... 21 Materiales a utilizar: ..................................................................................................... 21 Actividades .................................................................................................................. 21 Carpeta de Trabajos Prácticos de Genética. 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Cuarto encuentro .............................................................................................................. 22 Objetivo de la actividad del cuarto encuentro: .............................................................. 22 Materiales a utilizar: ..................................................................................................... 22 Actividades .................................................................................................................. 22 Segregación para yellow............................................................................................... 23 Segregación para white ................................................................................................ 23 Estimación de Dominancia de Curly............................................................................. 23 Principio de Transmisión independiente ....................................................................... 24 Informe final: ............................................................................................................... 24 TRABAJO PRÁCTICO N° 7: La ciencia en los diarios. Discusión de artículos publicados aplicando herramientas de la Genética Molecular ................................................................. 26 Objetivos ......................................................................................................................... 26 Desarrollo ........................................................................................................................ 26 Lee analíticamente el siguiente artículo ........................................................................ 26 Responde las siguientes preguntas ................................................................................ 26 TRABAJO PRÁCTICO N° 8: Cromatografía de ojos en Drosophila melanogaster ............. 27 Objetivos ......................................................................................................................... 27 Introducción ..................................................................................................................... 27 La cromatografía en placa delgada y su uso en drosófila............................................... 27 Desarrollo del trabajo práctico ...................................................................................... 28 Informe ............................................................................................................................ 28 Referencias bibliográficas del presente trabajo práctico .................................................... 28

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